课程名称： |
生物化学B实验技术 |
英译名称： |
biochemical B experiment |
课程代码： |
071002X106 |
适用专业： |
生物技术 |
课程学分： |
1 |
制定人： |
王凤泽 |
审核人： |
|
二〇二二年七月
课程基本信息
课程名称 |
生物化学B实验技术 |
课程学时 |
32 |
课程学分 |
1 |
授课学期 |
2春 |
授课对象 |
专业 |
生物技术 |
学制 |
4 |
教材名称 |
基础生物化学实验 |
教材出版信息 |
魏群主编 高等教育出版社 |
考核方式 |
√考试 √实验设计或实验报告 □其他 |
实验地点 |
生物综合实验室 |
辅助实践场地 |
无 |
课程成绩 |
平时考核（％） |
50 |
单元测试（％） |
20 |
期末成绩（％） |
30 |
课程负责人及团队骨干（5人以内） |
姓名 |
性别 |
学历 |
学位 |
职称 |
从教时间 |
王淑敏 |
女 |
研究生 |
博士 |
讲师 |
3 |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
课程教学大纲
一、课程介绍
1. 内容概述
要培养高素质的专业人才，除了讲授专业课，让学生了解生命科学领域发展的全貌外，更主要的是开设一门具有先进性和科学性的实验课程。本课程的教学目的是使学生能够系统地掌握生物化学基本实验技能，培养学生良好的科学素养、积极主动的学习态度，具备独立开展科研工作的能力，适应生命科学的发展和满足国家对生命科学与技术高水平人才的需求。课程实验内容涵盖了定量分析技术、层析技术、电泳技术及酶学技术等。
2. 学习目标
本课程的目标在于让学生熟练掌握常用生物化学实验方法的原理和技术，熟悉生物化学的常用仪器，训练学生的实验动手能力，加深学生对生物化学理论知识的理解，最终以培养学生严谨求实的科学态度、提高学生分析解决问题的能力为培养目标。
3. 先修知识技能
学习本门实验课程需要学生具备有机化学、分析化学和无机化学相关专业的基础知识和技能。
4. 学时安排
序号 |
内容 |
理论学时 |
实验一 |
琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制观察 |
4 |
实验二 |
SDS-PAGE蛋白样品的制备 |
4 |
实验三 |
Bradford法测定蛋白质浓度 |
4 |
实验四 |
SDS-PAGE测定蛋白质分子量 |
4 |
实验五 |
Western blotting |
4 |
实验六 |
脂肪酸的β-氧化 |
4 |
实验七 |
GST融合蛋白的分离纯化 |
4 |
实验八 |
GST融合蛋白的纯度鉴定（考试） |
4 |
二、课程教学计划
1. 教学方法
课程在保证学生能够掌握生物化学基础实验操作的同时，注意培养学生的独立实验设计及科研思维。
2. 拓展资源
《生化实验方法和技术》张龙翔, 张庭芳, 李令媛 编。高等教育出版社
《生物化学实验》杨志敏，谢彦杰编。高等教育出版社
三、课程思政计划
1. 方法与内容
实验开始前向学生发放本次实验大纲，然后教师讲解本次的实验原理，实验的大致流程，最后简要说明实验注意事项。学生自己实地操作，教师随时观察各组学生的实验操作。
2. 实践与拓展
网上收集部分相关实验视频，利用实验闲暇时间与同学一起观看。
四、实践（实验）教学内容纲要
实验一：琥珀酸脱氢酶的作用及竞争性抑制观察
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 熟练酶竞争性抑制实验的设计方法
3. 情感态度价值观 对本实验的设计方法进行改进
（二）教学内容
1. 重点讲练 丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用及实验注意事项
2. 难点分析 无
3. 自学内容 无
实验二：SDS-PAGE蛋白样品的制备
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握SDS-PAGE实验蛋白样品制备过程中各试剂的用途
2. 技能目标 掌握SDS-PAGE蛋白样品的制备方法
3. 情感态度价值观 样品的制备是实验成功的基本保证
（二）教学内容
1. 重点讲练 样品研磨（裂解）的注意事项，loading buffer的组成
2. 难点分析 如何避免蛋白质降解
3. 自学内容 无
实验三：Bradford法测定蛋白质浓度
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 熟悉Bradford法测定蛋白质浓度的方法
3. 情感态度价值观 对实验流程加以优化
（二）教学内容
1. 重点讲练 实验原理及注意事项
2. 难点分析 如何避免对测定结果的干扰
3. 自学内容 与Folin-酚法相比的优缺点
实验四：SDS-PAGE测定蛋白质分子量
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 SDS-PAGE测定蛋白质分子量的方法
3. 情感态度价值观 SDS-PAGE实验在生命科学研究中占有非常重要的地位
（二）教学内容
1. 重点讲练 实验原理及凝胶的注意事项
2. 难点分析 电泳的三个效应
3. 自学内容 SDS-PAGE的应用
实验五：Western blotting
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 熟悉免疫印迹的流程
3. 情感态度价值观 三种印迹实验的重要性
（二）教学内容
1. 重点讲练 转膜过程及注意事项
2. 难点分析 如何得到理想的实验结果
3. 自学内容 复习核酸印迹方法
实验六：脂肪酸的β-氧化
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 熟悉脂肪酸的β-氧化的实验流程
3. 情感态度价值观 对影响实验结果的操作方法进行改进
（二）教学内容
1. 重点讲练 实验原理及注意事项
2. 难点分析 影响实验结果的各种因素
3. 自学内容 无
实验七：GST融合蛋白的分离纯化
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理，理解应用
2. 技能目标 能够自行设计GST融合蛋白原核表达载体并纯化目的蛋白
3. 情感态度价值观 无
（二）教学内容
1. 重点讲练 实验原理及注意事项
2. 难点分析 如何避免蛋白质的降解及失活
3. 自学内容 GST pull down
实验八：GST融合蛋白的纯度鉴定（考试）
（一）目标与要求
1. 知识目标 掌握实验原理
2. 技能目标 学会分析实验结果
3. 情感态度价值观 拓展SDS-PAGE的应用范围
（二）教学内容
1. 重点讲练 实验原理及注意事项；考马斯亮蓝染色
2. 难点分析 实验中个人安全防护
3. 自学内容 银染
课程考核大纲
一、考核形式
考核方式以实验课表现为主，辅以实验结果的考核及学期结束后的实验考试。
二、考核内容
实验课堂操作及实验结果（50%）+实验报告（30%）+实验考试（20%）
1. 平时考核
实验态度、实验操作、课堂纪律、实验报告及值日，成绩占比80%。
2. 考试要求
考核内容包括所学实验的理论问题及实验操作，成绩占比为20%。
